圓二色光譜不斷走向諸多領域
圓二色光譜利用蛋白質(zhì)的圓二色性及不對稱分子對左右圓偏振光吸收的不同來進行結(jié)構(gòu)分析。蛋白質(zhì)或多肽中主要的光活性基團是肽鍵、芳香氨基酸殘基及二硫鍵等，當平面圓偏振光的吸收不相同時，會產(chǎn)生吸收差值。由于這種吸收差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圓偏振光變成了橢圓偏振光，即蛋白質(zhì)的圓二色性。通過圓二色光譜，可以在一定程度上分析蛋白質(zhì)、多肽樣品的二級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)。
圓二色光譜的供試品，大多數(shù)情況下的蛋白質(zhì)和多肽。蛋白質(zhì)的精確濃度是計算樣品二級結(jié)構(gòu)的關鍵，一般要求樣品濃度為0.2μg/μl，濃度過高，測試時信號不好，需稀釋，樣品純度要在90%以上，不要添加任何保護劑或其它物質(zhì)，樣品中應避免含有光吸收的雜質(zhì)，緩沖劑和溶劑在配制溶液前最好做單獨的檢查，透明性極好的磷酸鹽可用作緩沖體系。圓二色光譜在遠紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息，計算所得的是蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比例，即α-螺旋、β-折疊、轉(zhuǎn)角和不規(guī)則卷曲的比例。
圓二色光譜在近紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)側(cè)鏈生色基團色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。
圓二色光譜技術能快速、簡單、較準確地研究溶液中蛋白質(zhì)和多肽的構(gòu)象，并且運用斷流、電化學等附加裝置，結(jié)合溫度、時間等變化參數(shù)，已經(jīng)廣泛用于了解蛋白質(zhì)-配體的相互作用，監(jiān)測蛋白質(zhì)分子在外界條件誘導下發(fā)生的構(gòu)象變化，探討蛋白質(zhì)折疊、失活過程中的熱力學與動力學等多方面的研究。
圓二色光譜在遠紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息，計算所得的是蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比例；圓二色譜在近紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)側(cè)鏈生色基團色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。圓二色光譜用于拆分和估算的軟件不下十幾種，得到研究者廣泛認同的計算模式有幾種，但由于不同計算模式的理論基礎不同，所計算得到的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比例并不完全相同，但多數(shù)軟件對α-螺旋的估計還是比較準確的。
圓二色光譜根據(jù)圓二色性的數(shù)據(jù)來推斷這些試劑對照相明膠的多級結(jié)構(gòu)的影響。實驗結(jié)果表明：這些試劑對明膠的圓二色性的影響是很強烈的，不同試劑不僅影響的程度不一樣，而且影響的方式也不盡相同。比如:對明膠的240nm附近的負槽圓二色性的影響，在KCNS、脲的濃度的增大過程中圓二色性先是減小，經(jīng)過一個最低值，然后濃度增大過程中，圓二色性一直是增大的。
圓二色光譜在硫脲濃度增大的過程中，圓二色性卻是迅速減小的，很快就減小到零。不管上述助劑各自對明膠的圓二色性影響怎樣，但它們都有一個共同點，就是:改變或部分改變了明膠的多級結(jié)構(gòu)。
